菌落傳代操作規(guī)范和實驗步驟

霉菌培養(yǎng)箱是適合培養(yǎng)霉菌等真核微生物的試驗設(shè)備，因為大部分霉菌適合在室溫（25攝氏度）下生長，且在固體基質(zhì)上培養(yǎng)時需要保持一定的濕度，所以一般的霉菌培養(yǎng)箱由制冷系統(tǒng)，制熱系統(tǒng)，空氣加濕器和培養(yǎng)室，控制電路和操作面板等 部分組成，并使用溫度傳感器和濕度傳感器來維持培養(yǎng)室內(nèi)的溫度和濕度的穩(wěn)定。有些特殊的霉菌培養(yǎng)箱還可以設(shè)定溫度濕度隨培養(yǎng)時間變化。

為了提高對實驗用菌種的使用、管理，通過對菌種的傳代、保存，從而確保其在實驗中的有效性和準(zhǔn)確性。
范圍:無菌檢驗、微生物限度檢查檢驗用菌株。

內(nèi)容

傳代前將購進菌種及滅菌后的營養(yǎng)瓊脂小斜面置于室溫放置30分鐘，待溫度平衡后再移入陽性操作室內(nèi)。
換好衣服，做好防護。

第二、三代工作菌種的制備:

         從超低溫冰箱中取出所需的菌種冷凍管，置于35~40℃的水浴中進行解凍1分鐘。解凍后，放入生物安全柜內(nèi)，用冷卻后的滅菌接種環(huán)從冷凍管中取一環(huán)菌液接種于10ml 滅菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置于30~35℃的培養(yǎng)箱內(nèi)18~24小時，進行增菌培養(yǎng)。(第二代)培養(yǎng)后，用冷卻的滅菌接種環(huán)從增菌液中沾取一環(huán)接種于相應(yīng)的培養(yǎng)基斜面上貼上菌種標(biāo)簽，置于30~35℃的 150L霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)18~24小時，進行培養(yǎng)。確認符合后置于5℃的冰箱內(nèi)保存。使用時將培養(yǎng)出的斜面用、5ml的滅菌生理鹽水將斜面上的菌落洗下制成菌懸液使用。(第三代)在第三代菌種有效期內(nèi)進行第四代的接種傳代。

第四、五代工作菌種的制備:

         從5℃的冰箱內(nèi)取出第三代工作菌種，用冷卻的滅菌接種環(huán)挑取1個菌落接種于相應(yīng)的瓊脂斜面培養(yǎng)基中，置于30~35℃的 150L霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18~24小時后，確認符合后置于5℃的冰箱內(nèi)作為第四代工作菌種保存，備用。
接種操作規(guī)范

         點燃酒精燈，左手握住菌種斜面，將管口靠近火焰旁，右手拿接種棒后端，將接種環(huán)燒紅30秒鐘，隨后將全部接種棒金屬部分在火焰上燒灼，往返通過3次。右手用無名指、小指及掌部夾住硅膠塞，左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼，右手再輕輕撥開硅膠塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下，稍冷卻再移至菌苔上，刮取少量菌苔，隨即取出接種棒，并將菌種管口移至火焰旁。塞上硅膠塞，左手將菌種管放下，取營養(yǎng)瓊脂小斜面一支，右手用無名指、小指及掌部夾住硅膠塞，左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼，右手再輕輕撥開硅膠塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的底部，由低向上，將接種環(huán)輕貼斜面的表面曲折移動，使菌劃在斜面的表面上。

         取出接種環(huán)，在火焰旁將培養(yǎng)基管硅膠塞堵上，然后將接種過菌的接種棒在火焰上燒灼滅菌。

         將已接種好的細菌管置30℃一35℃細菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24小時，霉菌管置23℃  -  28℃ 150L霉菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)5-7日。取出后放入冰箱保存并上鎖。

         菌種的傳代次數(shù)不得超過5代，每一菌株每次傳代不超過15支; 1支作為下次傳代用，其余作為檢驗用，每月傳代一次。

         傳代完畢后， 在每支試管上標(biāo)明菌株名稱、代數(shù)、序號、傳代日期、有效期，如果對上述方法有什么疑問或想了解更多歡迎聯(lián)系上海喆圖科學(xué)儀器有限公司。