創(chuàng)傷弧菌的制備及鑒定

       創(chuàng)傷弧菌屬革蘭氏陰性弧菌。在液體培養(yǎng)基中菌體大小為0.7*2-3μm,稍彎曲。在固體培養(yǎng)基中呈多樣性。有單鞭毛。培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)要求一般，MAX適生長(zhǎng)溫度為30℃，兼性厭氧。在無(wú)NaCl及超過(guò)8%NaCl的培養(yǎng)基中不生長(zhǎng)，可在0.5%NaCl及3%NaCl的蛋白胨水中生長(zhǎng)，在含6%NaCl的蛋白胨水中生長(zhǎng)良好。

         非冷凍樣品采集后應(yīng)立即置7℃～10℃生化培養(yǎng)箱保存，盡可能及早檢驗(yàn)；冷凍樣品應(yīng)在45 ℃以下不超過(guò)15 min或在2℃～5℃不超過(guò)18 h解凍；如果樣品需要冷凍貯存，應(yīng)在樣品中加等量緩沖甘油-氯化鈉溶液（液體樣品應(yīng)加雙料），推薦貯存溫度為-70 ℃以下。
甲殼類，則應(yīng)先在自來(lái)水中洗刷外殼并甩干表面水分，然后以無(wú)菌操作打開外殼，按上述要求取相應(yīng)部分。
       以無(wú)菌操作取檢樣25 g（mL），加入3％氯化鈉堿性蛋白胨水225 mL，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8 000 r/min均質(zhì)1 min，或拍擊式均質(zhì)器拍擊2 min，制備成1:10的均勻稀釋液。如無(wú)均質(zhì)器，則將樣品放入無(wú)菌乳缽中磨碎，然后放在500 mL的滅菌容器內(nèi)，加225 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水，并充分振蕩。魚類和頭足類動(dòng)物取表面組織、腸或鰓。貝類取全部?jī)?nèi)容物，包括貝肉和體液；甲殼類取整個(gè)動(dòng)物，或者動(dòng)物的中心部分，包括腸和鰓。
        嗜鹽性試驗(yàn)：挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落，分別接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水，生化培養(yǎng)箱內(nèi)36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h，觀察液體混濁情況。創(chuàng)傷弧菌在無(wú)氯化鈉、8％氯化鈉和10％氯化鈉的胰胨水中不生長(zhǎng)，在6％氯化鈉的胰胨水中生長(zhǎng)旺盛。
氧化酶試驗(yàn)：挑選純培養(yǎng)的單個(gè)菌落進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)，創(chuàng)傷弧菌為氧化酶陽(yáng)性。
涂片鏡檢：將可疑菌落涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢觀察形態(tài)。創(chuàng)傷弧菌為革蘭氏陰性，呈棒狀或弧狀。
        挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落，轉(zhuǎn)種3％氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層，36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h觀察結(jié)果。創(chuàng)傷弧菌在3％氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為底層變黃不變黑，無(wú)氣泡，斜面顏色不變或紅色加深，偶爾斜面變黃。
        V-P試驗(yàn)：以接種針由3％氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面挑取少許培養(yǎng)物穿刺3％氯化鈉MR-VP培養(yǎng)基，36℃±1 ℃培養(yǎng)24 h，在加V-P試劑前應(yīng)先觀察動(dòng)力。沿穿刺線周圍呈擴(kuò)散性生長(zhǎng)為動(dòng)力陽(yáng)性。