微生物接種方法及主要微生物菌落形態(tài)

        微生物接種即按無菌操作技術(shù)要求將目的微生物移接到培養(yǎng)基質(zhì)中的過程，接種細(xì)菌應(yīng)用接種針（環(huán)）來沾取細(xì)菌標(biāo)本，進(jìn)行接種。一般用右手持筆式較為方便，左手可持培養(yǎng)基進(jìn)行配合，其接種程序可分為：滅菌接種環(huán)→稍冷→沾取細(xì)菌樣品→進(jìn)行接種（包括：啟蓋或塞、接種劃線、加蓋或塞）→進(jìn)行接種環(huán)滅菌等五個(gè)程序。不同培養(yǎng)基，接種方法也不同。
        接種常見方法有：平板劃線接種法、斜面接種法、傾注培養(yǎng)法、穿刺接種法、液體接種法。
        菌落是由某一微生物的少數(shù)細(xì)胞或孢子在固體培養(yǎng)基表面繁殖后所形成的子細(xì)胞群體，單個(gè)菌體在固體平面培養(yǎng)基上生長繁殖形成的肉眼可見的群體。因此，菌落形態(tài)在一定程度上是個(gè)體細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)在宏觀上的反映。由于每一大類微生物都有其*的細(xì)胞形態(tài)，因而其菌落形態(tài)特征也各異。因此每一大類微生物都有其一定的菌落特征，可通過這些特征差異區(qū)分和識(shí)別。

        接種方法  
        斜面接種法
        此法主要用于移種純菌，使其增殖后用于鑒定或保存菌種。通常是從平板培養(yǎng)物上挑取某一單獨(dú)菌落或者從一支已長好的斜面菌種，移種至斜面培養(yǎng)基上，接種步驟如下：
        （一）左手拿兩支試管，一支為經(jīng)滅菌的斜面，另一支為已長好的菌種。右手持接種環(huán)或接種針通過火焰滅菌后冷卻，并同時(shí)以右手小指和無名指輕輕拔取兩支試管的棉塞或試管帽（先轉(zhuǎn)動(dòng)棉塞后拔去），夾持于手指間。
        （二）將試管口通過火焰數(shù)次，并稍轉(zhuǎn)動(dòng)，以防止外界的污染。
        （三）首先將接種環(huán)伸入有菌試管，使接種環(huán)接觸菌苔取少量菌，取出接種環(huán)，立即將管口通過火焰滅菌后將接種環(huán)伸入斜面管內(nèi)，先從斜面底部到頂端拖一條接種線，再自下而上的蜿蜒涂布，或直接自斜面底部向上蜿蜒涂布。此步注意接種環(huán)不可碰試管壁和接種時(shí)不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。
        （四）燒試管口，塞好棉塞或蓋好試管帽，將接種環(huán)插到酒精瓶中。
        平板劃線接種法（分離培養(yǎng)法）
        是將細(xì)菌分離培養(yǎng)的常用技術(shù)，其目的是將混有多種細(xì)菌的培養(yǎng)物，或標(biāo)本中不同的細(xì)菌使其分散生長，形成單個(gè)菌落或分離出單一菌株，便于識(shí)別鑒定。平板劃線接種方法較多，其中以分段劃線法與曲線劃線法較為常用。 
        （一）分段劃線法：本法多用于含菌量較多的標(biāo)本。方法是以接種環(huán)沾取少許樣品先涂布于平板培養(yǎng)基表面一角作為段劃線（劃線時(shí)接種環(huán)與培養(yǎng)基表面呈45度角），然后將接種環(huán)置火焰上滅菌，冷卻（可接觸平板試之，如不融化瓊脂，即已冷卻），于第二段處再作劃線，且在開始劃線時(shí)與段的劃線相交接數(shù)次，以后劃線不必再相接，待第二段劃完時(shí)，再如上法滅菌，接種劃線，依次劃至MAX后一段，滅菌接種環(huán)。這樣每一段劃線內(nèi)的細(xì)菌數(shù)逐漸減少，即以獲得單個(gè)菌落，劃線接種完畢，蓋好平皿蓋，倒置（平板底部向上）于37℃溫箱中培養(yǎng)。
        （二）連續(xù)劃線法：此法多用于接種材料中含菌數(shù)量不太多的樣品或培養(yǎng)物。方法是先將樣品或培養(yǎng)物涂于平板表面的一角，然后用接種環(huán)自樣品涂擦處開始，向左右兩側(cè)劃開并逐漸向下移動(dòng)，連續(xù)劃成若干條分散的平等線。
        液體接種法
        此法多用于單糖發(fā)酵試驗(yàn)等，接種方法與斜面接種方法基本相同。以左手持培養(yǎng)基與菌種管，右手持接種環(huán)和拔持棉塞，將挑取的菌落或菌液接種于液體培養(yǎng)基內(nèi)。

        四大微生物的細(xì)胞形態(tài)和菌落特征比較  
        細(xì)菌：
        細(xì)菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致，邊緣一般看不到細(xì)胞，與培養(yǎng)基不結(jié)合，顏色多樣，菌落外觀形態(tài)小而凸起或大而平坦，菌落透明或稍透明。細(xì)菌的細(xì)胞相互關(guān)系是單個(gè)分散或有一定的排列方式的。它的形態(tài)特征是小二而均勻，個(gè)別有芽孢。細(xì)胞生長速度一般很快，細(xì)菌一般有臭味。
        酵母菌：
        大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似，但比細(xì)菌菌落大而凸起，菌落表面光滑、濕潤、粘稠，容易挑起，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊緣、中央部位的顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個(gè)別為黑色，菌落稍透明，不與培養(yǎng)基結(jié)合。菌落邊緣可見球狀，卵圓狀或假絲狀細(xì)胞。氣味多帶酒香味。
        放線菌：
        放線菌在固體培養(yǎng)基上形成與細(xì)菌不同的菌落特征，放線菌菌絲相互交錯(cuò)纏繞形成質(zhì)地致密的小菌落，干燥、不透明、難以挑取，當(dāng)大量孢子覆蓋于菌落表面時(shí)，就形成表面為粉末狀或顆粒狀的典型放線菌菌落，由于基內(nèi)菌絲和孢子常有顏色，使得菌落的正反面呈現(xiàn)出不同的色澤。細(xì)胞相互關(guān)系是絲狀交織，形態(tài)特征細(xì)而均勻，生長速度慢，常有泥腥味。
        霉菌：
        由于霉菌的菌絲較粗而長，因而霉菌的菌落較大，有的霉菌的菌絲蔓延，沒有局限性，其菌落可擴(kuò)展到整個(gè)培養(yǎng)皿，有的種則有一定的局限性，直徑1~2厘米或更小。菌落質(zhì)地一般比放線菌疏松，外觀干燥，不透明，呈現(xiàn)或緊或松的蛛網(wǎng)狀、絨毛狀或棉絮狀；菌落與培養(yǎng)基的連接緊密，不易挑??；菌落正反面的顏色和邊緣與中心的顏色常不一致，顏色多樣。菌落邊緣可見粗絲狀細(xì)胞。細(xì)胞相互關(guān)系是絲狀交織，形態(tài)特征粗而分化，細(xì)胞一般生長較快，氣味往往有霉味。