如何用生化培養(yǎng)箱做酚類廢水生物處理實驗

TCP是有機廢水中一種zui常見的氯酚類物質(zhì)，主要來源于造紙、印染、紡織等行業(yè)廢水。由于TCP的水溶解性較大，且土壤等固體物質(zhì)對其吸附和固定作用較弱，常以水為載體廣泛存在。TCP結構較為穩(wěn)定，難以降解，且具有三致性，美國環(huán)?？偩忠褜⑵淞袨榱?ldquo;優(yōu)先污染物”。利用真菌、青霉菌、曲霉菌和酵母菌等生物法處理酚類廢水，工藝簡單，效果好。
材料與方法
1.菌種與培養(yǎng)基
菌種：從膨潤土中分離得到的一種鐮刀菌，確定為層出鐮刀菌，屬于鐮刀菌屬。用生化培養(yǎng)箱的培養(yǎng)溫度為30℃。
固體培養(yǎng)基：KH2PO41.0g，MgSO4·7H2O0.5g，蛋白胨5g，葡萄糖10g，瓊脂15~20g，蒸餾水500mL。滅菌后加入相應濃度的TCP搖勻，在無菌操作臺上倒平板，待平板冷卻凝固后進行接種，zui后于30℃生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)。
液體培養(yǎng)基：CaCl20.1g，KH2PO40.5g，NaCl0.2g，H2O1000mL，微量元素(FeSO4·7H2O3.82g，CoCl2·6H2O0.25g，H3BO36mg，CuSO4·5H2O2.9mg等)1mL。所有培養(yǎng)基均在121℃下滅菌30min。
孢子懸濁液：在馴化好且長有豐富的白色分生孢子的蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基中刮取部分孢子置于無機鹽固體培養(yǎng)基(含100mg·L-1TCP)上，30℃恒溫培養(yǎng)。7d后轉接于150mg·L-1TCP的無機鹽固體培養(yǎng)基馴化3次，待菌體大量長出后于無菌條件下刮取孢子至無菌蒸餾水中，振蕩分散成乳白色的孢子懸液，光密度約為0.1(OD400)，孢子個數(shù)為3.1×106個·mL-1。

2.試劑與儀器
試劑：氨水，乙醇(純度>90%)，濃鹽酸，稀鹽酸，三氯酚(TCP)(化學純)，4-氨基安替比林，NaCl，緩沖溶液。
主要儀器：液相色譜儀，電子天平，紫外可見分光光度計，電熱恒溫鼓風干燥箱，生化培養(yǎng)箱，恒溫振蕩器，單人水平垂直兩用凈化工作臺，高壓蒸汽滅菌器，高速冷凍離心機。

3 .TCP的降解條件
取0.05g過濾出的菌體(濕重)的菌體孢子懸濁液(600nm處吸光度為0.16～0.165)，加入50mL液體培養(yǎng)基濃度一定的TCP溶液中，在一定溫度、pH、150r·min-1下繼續(xù)培養(yǎng)，每間隔24h測定TCP濃度，分別研究溫度、pH、外加碳源、氮源、氯離子及TCP初始濃度對其降解效率的影響。溫度影響實驗條件為pH7.0，TCP初始濃度為30mg·L-1，溫度25℃、30℃和35℃。pH影響實驗條件為30℃，TCP初始濃度為30mg·L-1，pH為2.0~8.0。外加碳源影響實驗條件為30℃、pH7.0，TCP初始濃度為30mg·L-1，葡萄糖(1g·L-1.3g·L-1.5g·L-1)。氮源影響實驗條件為30℃、pH7.0，TCP初始濃度為30mg·L-1，氮源物質(zhì)為NH4Cl、NaNO2、蛋白胨、NH4NO3和NaNO3(濃度均為0.2g·L-1)。氯離子影響實驗條件為30℃、pH7.0，TCP初始濃度為30mg·L-1，NaCl濃度為0~0.6g·L-1。TCP濃度影響實驗條件為30℃、pH7.0，TCP初始濃度為10~50mg·L-1。平行試驗3次，取其平均值。